Título del proyecto
Análisis proteómico del interactoma del colesterol en Tetrahymena thermophila
Resumen del proyecto
Nuestro grupo utiliza el ciliado Tetrahymena thermophila para el desarrollo de un proceso de bio-conversión industrial de esteroles exógenos en pro-vitamina D3. Hemos caracterizado casi todas la enzimas intervinientes en el proceso, identificando sus genes y reconstituyendo el sistema en organismos GRAS, para la producción de alimentos funcionales. Resta identificar un gen, responsable de la síntesis de un subproducto indeseable. La obtención de mutantes nulas en dicha actividad, producirían cepas del ciliado capaces de transformar cuantitativamente colesterol en 7-dehidrocolesterol (pro-vitamina D3). Proponemos la aplicación de una aproximación quimioproteómica para la identificación de la enzima responsable. La estrategia se basa en la síntesis de sondas o análogos de colesterol, con un grupo diazirínico fotoreactivo en uno de sus anillos y un grupo “clickeable” en su cadena lateral. Este último permite ser modificado químicamente, luego de la interacción y crosslinking de las sondas con las proteínas con afinidad por colesterol presentes en el ciliado. Esto facilita la purificación de dichas proteínas. Este “interactoma” se someterá a análisis proteómicos por LC-MS/MS, seleccionándose genes de oxigenasas para su identificación funcional por RNAi. Este análisis identificará adicionalmente, proteínas involucradas en el transporte de colesterol y en la señalización que conduce a la inducción de las enzimas modificadoras.
