Virología Humana

Resumen

La epidemiología molecular de infecciones virales integra herramientas de biología molecular y de epidemiología tradicional a fin de detectar y caracterizar a nivel molecular los virus más prevalentes en una región, determinar la emergencia de nuevos virus y conocer su impacto en la patología humana, tanto a nivel individual como poblacional. Nuestro grupo está abocado al estudio de la epidemiología molecular de las infecciones causadas por papillomavirus  en distintos epitelios. El objetivo final esexpandir el conocimiento sobre la diversidad, la filogenia y la historia evolutiva de la familia Papillomaviridae.

Líneas de Investigación

Epidemiología molecular de papilomavirus

Nuestro interés radica en la identificación de papillomavirus humanos (HPV) en distintos epitelios y en la caracterización molecular de nuevos virus, información necesaria para avanzar en el conocimiento sobre la historia evolutiva de la familia Papillomaviridae. Para abordar estas temáticas desarrollamos estrategias metodológicas propias.

En lo concerniente a los HPV cutaneotrópicos, hemos desarrollado un sistema de cebadores que, combinados a una metodología ultrasensible, permitió la identificación de numerosos tipos distintos de HPV en muestras de piel y condujo a la caracterización del HPV115 (especie Beta-3), el primer HPV cutaneotrópico descripto en Argentina y Sudamérica. Con el fin de avanzar en la caracterización de nuevos HPV, hemos desarrollado una estrategia altamente sensible para facilitar la amplificación de ADN circular en bajo número de copias, denominada “PCR de la gota colgante para fragmentos largos de ADN”.  Su aplicación permitió la caracterización de 4 nuevos tipos pertenecientes a distintas especies del género Gama-PV: HPV156 (Gama-18), HPV157 (Gama-12) y HPV158 (Gama-1), HPV205 (Gama-1). Recientemente, y en el marco de la colaboración con el grupo del Dr. Mario Poljak, hemos caracterizado el genoma completo de HPV204,  el tercer tipo descripto dentro del género Mu-PV. Actualmente estamos optimizando un sistema de amplificación por PCR y revelado colorimétrico para la detección de tipos pertenecientes al género Gama-PV. Este sistema de tamizaje permitirá investigar la frecuencia de los tipos del género Gama-PV caracterizados por nuestro grupo a fin de determinar el tropismo y el significado clínico de sus infecciones.

En lo concerniente a los HPV mucosotrópicos, hemos desarrollado un ensayo denominado L1HPVPCR para la detección del ADN de HPV basado en PCR, hibridación líquida y revelado colorimétrico que permite determinar el estado de infección y el tipo de HPV involucrado. Actualmente el L1HPVPCR permite tipificar 16 tipos de HPV: 2 de bajo riesgo (6 y 11) y 14 de alto riesgo oncogénico ( 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 66, 68 y 73). Este instrumento fue utilizado en un estudio de prevalencia multicéntrico orientado a conocer la epidemiología de HPV en cérvix de mujeres no vacunadas expuestas al virus (sexualmente activas) sin manifestaciones clínicas (ausencia de lesiones). Este estudio sienta las bases para evaluar a futuro la eficacia de la vacunación masiva contra HPV en nuestra región. El ensayo L1HPVPCR ha sido seleccionado en el año 2015 para radicarse en la Aceleradora de Proyectos Biotecnológicos Bio.r impulsada por el IBR con el objetivo final de formar una empresa de base tecnológica dedicada al desarrollo de kits de diagnóstico molecular, en principio para la infección de HPV en cérvix.

Por último, hemos iniciado proyectos orientados a la búsqueda y a la caracterización de nuevos papilomavirus en animales, particularmente en monos del nuevo mundo y en murciélagos de la especie Tadaridabrasiliensis, para lo cual establecimos colaboraciones con investigadores de Misiones y Tucumán, respectivamente. Estas acciones constituyen un pre-requisito para poder entender la historia evolutiva de la familia Papillomaviradae y dilucidar la relación entre la infección y la enfermedad.

 

Publicaciones Seleccionadas

  • Bolatti ME and Chouhy D, Casal PE, Perez GR, Stella EJ, Sanchez A, Gorosito M, FernandezBussy R, Giri AA (2016). “Characterization of novel human papillomavirus types 157, 158 and 205 from healthy skin and recombination analysis in genus γ-Papillomavirus”. Infection, Genetics and Evolution 42:20-29.
  • Casal PE, Chouhy D, Bolatti EM, Perez GR, Stella EJ, Giri AA (2015). “Evidence for Homologous Recombination in Chikungunya Virus”. MolPhylogenetEvol 85:68-75.
  • Chouhy D, Bolatti EM, Piccirilli G, Sanchez A, Fernandez Bussy R, Giri AA (2013). “Identification of HPV-156, the prototype of a new human gammapapillomavirus species, by a generic and highly sensitive PCR strategy for long DNA fragments”. J Gen Virol 94(3):524-533.
  • Chouhy D, MamprínD´Andrea R, Iglesias M, Messina A, Ivancovich JJ, Cerda B, Galimberti D, Bottai H, Giri AA (2013). “Prevalence of human papillomavirus infection in Argentinean women attending two different hospitals prior to the implementation of the National vaccination program”. J Med Virol 85:655–666.
  • Chouhy D, Bolatti EM, Perez GR, Giri AA (2013). “Analysis of the genetic diversity and phylogenetic relationships of putative human papillomavirus types”. J Gen Virol 94(11):2480-2488.
  • Chouhy D, Gorosito M, Sánchez A, Serra EC, Bergero A, FernandezBussy R, Giri AA (2010). “New generic primer systemtargetingmucosal/genital and cutaneous human papillomaviruses leads to thecharacterization of HPV 115, a novel Beta-papillomavirusspecies3”. Virology 397(1):205-216.
  • Chouhy D, Benitez Gil L, Nocito AL, Wojdyla D, Ornella L, Cittadini J, Gardiol D, Giri AA (2006). “Development and evaluation of a colorimetric PCR system for the detection and typing of human papillomaviruses”. Int J Mol Med 18(5):995-1003.

Colaboradores

  • Dr. Ramón FernandezBussy. Cátedra de Dermatología, Facultad de Ciencias Médicas, UNR.
  • Prof. Mario Poljak, Instituto de Microbiología e Inmunología de la Facultad de Medicina, Universidad de Ljubljana, Eslovenia.
  • Dr. Rubén Bárquez, Programa de Investigaciones de Biodiversidad Argentina, Facultad de Ciencias Naturales/Instituto Miguel Lillo, UNT.
  • Dr. Domingo J. Liotta, Laboratorio de Biología Molecular Aplicada, Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales, UNaM.
  • Dr. Rubén MamprínD´Andrea. División de Ginecología, Hospital-Escuela “Eva Perón”.

Subsidios

  • Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica (ANPCyT).
  • Instituto Nacional del Cáncer (INC).
  • Cooperación Bilateral con Eslovenia (MINCyT-MHEST).
  • Universidad Nacional de Rosario (UNR)
  • Servicios Tecnológicos de Alto Nivel (STAN CONICET)

Director

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Giri, Adriana
Sede Facultad
Email: giri@ibr-conicet.gov.ar
Tel: +54 341 4350596/4350661
Oficina Int: 116
Laboratorio Int: 134

Investigadores

  • Diego Chouhy

Becarios Post-Doctorales

  • Elisa Bolatti

Imágenes

Filogenia de los tipos potenciales de HPV identificados con la estrategia de PCR de la gota colgante para fragmentos largos en relación a HPVs de referencia.

Estrategia de PCR de la gota colgante para fragmentos largos. (a) Estrategia general para la generación de mitades genómicas del ADN de HPV. (b) Comparación de las sensibilidades analíticas de la PCR de la gota colgante para fragmentos largos y de la PCR simple para fragmentos largos.